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    乙烯是唯一的气体植物激素,也是最早被鉴定的植物激素之一。它能调节植物生长的许多过程,也影响植物对各种胁迫的反应。其最重要的功能是促进果实的成熟。

    乙烯不是由特定组织产生的,几乎所以植物组织都可以产生乙烯。通常,乙烯在植物体内保持较低水平,但是植物生长的某些阶段或某些压力事件会迅速诱导乙烯产生。与其它激素不同,植物不会通过运输、降解、失活等手段调节乙烯的水平,因此乙烯生物合成的调节对植物体内乙烯的含量至关重要。

    高等植物中乙烯的合成途径非常简单,即S-腺苷甲硫氨酸(SAM),合成1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC),再由ACC合成乙烯。其中SAM合成ACC的速度是乙烯合成的重要限制因素,ACC合成酶(ACS)为乙烯合成的限速酶。而ACC的积累往往和乙烯含量为正相关。因此检测ACC的含量,以及测定ACS的活性,对于研究乙烯的合成非常重要。

    瑞源生物采用先进的技术手段,利用亲水萃取,可以高效、稳定提取并检测植物内源ACC,并检测ACS活性。


乙烯前体ACC的化学方程式

   

 

 

    乙烯是唯一的气体植物激素,也是最早被鉴定的植物激素之一。它能调节植物生长的许多过程,也影响植物对各种胁迫的反应。其最重要的功能是促进果实的成熟。

    乙烯不是由特定组织产生的,几乎所以植物组织都可以产生乙烯。通常,乙烯在植物体内保持较低水平,但是植物生长的某些阶段或某些压力事件会迅速诱导乙烯产生。与其它激素不同,植物不会通过运输、降解、失活等手段调节乙烯的水平,因此乙烯生物合成的调节对植物体内乙烯的含量至关重要。

    高等植物中乙烯的合成途径非常简单,即S-腺苷甲硫氨酸(SAM),合成1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC),再由ACC合成乙烯。其中SAM合成ACC的速度是乙烯合成的重要限制因素,ACC合成酶(ACS)为乙烯合成的限速酶。而ACC的积累往往和乙烯含量为正相关。因此检测ACC的含量,以及测定ACS的活性,对于研究乙烯的合成非常重要。

    瑞源生物采用先进的技术手段,利用亲水萃取,可以高效、稳定提取并检测植物内源ACC,并检测ACS活性。


乙烯前体ACC的化学方程式

   

 

 

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实验

服务简介
一、酵母单杂交

酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具,被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控,如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等。

 

 二、酵母双杂交

酵母双杂交及系统是一种鉴定和检测活细胞内蛋白质相互作用的研究方法,是在真核模式生物酵母中进行的,因其具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点,现已被应用于多个研究领域。分为膜蛋白和核蛋白双杂交。


应用领域
植物:自交不亲和机理研究

病毒:朊蛋白、病毒蛋白相互作用蛋白筛选

信号通路:转录因子、雌激素α受体相互作用蛋白筛选

癌症医学:癌症相关蛋白、凋亡相关蛋白相互作用蛋白筛选

寄生虫医学:毒力因子致病机制研究、半乳糖凝集素互作蛋白筛选

基础原理研究:肌球蛋白、蛋白酶体调节因子相互作用蛋白筛选、受精卵发育

   

项目名称

内容

交付标准

服务周期

酵母双杂文库构建

RNA提取、反转录、 cDNA处理、基因与载体的连接、文库质粒提取、文库产品指标

酵母双杂交文库甘油菌、酵母双杂交文库质粒、文库构建报告、文库构建图片

25个工作日,如需转化酵母延长15个工作日

酵母双杂文库筛选

诱饵质粒构建与活测、与双杂库共转感受态酵母、文库筛选、阳性克隆鉴定、回转验证

完整的筛库流程实验报告、鉴定出的阳性克隆测序

2个月左右

 

订购信息

 

文库构建流程

总RNA提取——mRNA分离——cDNA合成——基因与载体的连接——文库质粒提取——文库产品指标

单/双杂筛选流程

诱饵质粒构建与活测——与单/双杂库共转感受态酵母——文库筛选——阳性克隆鉴定——回转验证——报告整理

 

样品要求
细胞样本:细胞数量大于1×10^7;动物样本:大于1 g;植物样本:大于2 g;总RNA:大于200 µg
筛选服务:客户提供诱饵基因或构建好的诱饵质粒

 案例分析

1载体构建
根据客户提供序列构建 BD 重组载体,进行引物设计和测序验证。
2自激活检测结果

  

                                     pGADT7-LargeT/pGBKT7-p53 为阳性对照

                               pGADT7-LargeT/pGBKT7-LaminC 为阴性对照

实验现象结论

对照菌株在 SD-TL 缺陷平板上都能正常生长,而仅有阳性对照可在 SD-TLHA缺陷平板生长。pGADT7+pGBKT7-ABC 转化子中随机挑选的 6 个菌落在 SD-TLHA 缺陷平板上不能生长,生长状态同阴性对照,因此不存在自激活。

结果:ABC 诱饵克隆没有自激活作用。

3文库筛选

4阳性克隆鉴定

 

      筛库阳性克隆 ADE2 和 HIS3 报告基因检测

编号 1-34 分别是筛到的 34 个初始阳性克隆,编号“+”为阳性对照,编号“-”为阴性对照。

 

在 ADE2 和 HIS3 报告基因的检测结果中,可以看到,阳性对照在SD-TL和SD-TLHA 都能正常生长,而阴性对照由于不会激活 ADE2 和 HIS3 报告基因,在 SD-TL 可以正常生长,但在缺少 Histidine 和 Adenine 这两种成分的 SD-TLHA 平板上不能生长。因此,在34个初始阳性克隆中,除 4、8、26、28、30、32、33、34 号之外均能在SD-TLHA 生长,表明激活了HIS3和ADE2 报告基因。

 

5)回转验证

 

阳性克隆回转验证 His Ade 报告基因检测

 

15 种阳性克隆在SD-TLSD-TLHA 缺陷平板的生长情况。标注“+”为阳性对照,标注“-”为阴性对照。

 

结果显示,15 个阳性克隆中 22 号不能激活 HIS3 ADE2 报告基因;其余均能激活 HIS3 ADE2 报告基因。

 

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