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产品简介
    

 双分子荧光互补 (BiFC)是一项可直观、快速判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用的新技术。该技术利用在荧光蛋白特定位点插入外源片段而不影响GFP荧光活性的特性,在其分割为两个无荧光活性的蛋白片段, 即N端片段(N-fragment)和C端片段(C-fragment),当能够发生相互作用的两个蛋白分别与N端片段和C端片段连接形成融合蛋白并在活细胞中共同表达时, 荧光蛋白的N端片段与C端片段就能够相互靠近, 重新形成活性的荧光基团而发出荧光。
 

双分子荧光互补系统

 

1. YFP普通型:
该系统适合蛋白相互作用较强的蛋白互作研究,YFP荧光强度控制在较低的水平,不受背景等因素干扰。


2. YFP增强型:
该系统适合膜蛋白互作等蛋白之间相互作用较弱的蛋白互作研究,YFPn和YFPc经过人工编辑,YFP荧光增强,便于观察互作弱的荧光信号。同时对206位氨基酸A进行突变成K,降低了背景等因素干扰,结果真实可靠。
 

 

   

项目名称

内容

交付标准

服务周期

酵母双杂文库构建

RNA提取、反转录、 cDNA处理、基因与载体的连接、文库质粒提取、文库产品指标

酵母双杂交文库甘油菌、酵母双杂交文库质粒、文库构建报告、文库构建图片

25个工作日,如需转化酵母延长15个工作日

酵母双杂文库筛选

诱饵质粒构建与活测、与双杂库共转感受态酵母、文库筛选、阳性克隆鉴定、回转验证

完整的筛库流程实验报告、鉴定出的阳性克隆测序

2个月左右

 

服务流程

 

1.构建包含目的蛋白的质粒;
需客户确认目的蛋白在荧光蛋白的N端还是C端。
2.重组目的质粒转化农杆菌;
3.农杆菌菌液注射烟草叶片;
4.共聚焦显微镜观察和拍照。

 

交付标准

 

1、完整的实验报告,包括详细的实验步骤及结果

2、原始图片,包含YFP、 DIC、Merge

3、构建好的质粒及农杆菌

实验目的:通过BIFC实验验证A、B蛋白能相互作用。

实验设计:
A:(GFP组) pCAMBIA1300-35S-GFP(GFP)
B:(阳性组) pCAMBIA1300-35S-YN173-P1(YN173-P1) + pCAMBIA1300-35S-YC155-P2(YC155-P2)
C:(阴性组) pCAMBIA1300-35S-YN173(YN173) +pCAMBIA1300-35S-YC155(YC155)
D:(实验组) pCAMBIA1300-35S-YN173-A(YN173-A)+pCAMBIA1300-35S-YC155-B(YC155-B)
E:(阴性组) pCAMBIA1300-35S-YN173-A(YN173-A)+pCAMBIA1300-35S-YC155(YC155)
F:(阴性组) pCAMBIA1300-35S-YN173(YN173)+pCAMBIA1300-35S-YC155-B(YC155-B)


如图所示,GFP蛋白正常表达,有荧光信号;阳性对照组有荧光信号;阴性对照组均没有荧光信号;YN173-A与YC155-B共转染后,能明显观察到荧光,由此可知A蛋白与B蛋白存在互作。

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