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Anti-GFP标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法)

Anti-GFP标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法)

▼产品简介

免疫沉淀或免疫共沉淀是研究蛋白或蛋白与蛋白相互作用(Protein-Protein Interactions, PPIs)的常用实验技术,通过使用特异性抗体和可结合抗体的介质(如Protein A/G Agarose或Protein A/G磁珠),或直接使用偶联特异性抗体的介质(如琼脂糖凝胶或磁珠),然后通过离心或磁力从溶液中分离出抗原和抗体复合物,从而将目标蛋白质从复杂样品中分离出来,随后可以用于Western印迹检测或质谱分析等。

GFP标签的优点是便于观察,适合于观察蛋白在细胞内的定位,不用破碎组织细胞、不加任何底物、不用抗体,直接通过荧光显微镜就能在活细胞中观察到发出的绿色荧光,实时观察目的蛋白的表达情况,而且荧光性质稳定,细胞内的其它产物不会干扰GFP标签蛋白的检测,从而使其检测快速、简便、灵敏度高、重现性强,所以GFP被誉为活细胞探针。

▼产品规格

产品编号

CAT:RY8023

产品规格

配体

抗GFP标签抗体

磁珠表层材料

超顺磁亲水高分子磁珠

粒径大小

200nm

浓度

10mg/ml

结合量

>1.2mg/ml磁珠(对GFP标签蛋白的结合量)

建议pH使用范围

6~8

沉降系数

2mg/ml磁珠在60ul以下体积沉降时间应该不大于10s

磁珠保存液

1*PBS

保存

4℃,禁止冷冻,使用前请充分混匀

▼产品概述

抗GFP标签抗体免疫磁珠由高性能的特异性 IgG1 单克隆抗体与磁珠共价偶联,后期经过封闭处理,可以直接用于捕获GFP标签蛋白,具有较高的GFP标签融合蛋白结合量以及非特异结合低的特点,可用于GFP标签蛋白免疫沉淀以及蛋白的分离纯化。

▼应用场景与产品优势

Anti-GFP磁珠,也称Anti-GFP免疫磁珠或GFP抗体磁珠,是由高品质的重组GFP抗体与纳米级氨基磁珠共价偶联而成,可特异性地与动植物或微生物裂解液、血清、腹水等中含有GFP标签的蛋白结合,从而用于带有GFP标签的融合蛋白或其蛋白复合物的免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、免疫共沉淀(Co-IP)或纯化。

本产品特异性强,靶蛋白结合量高:每毫升磁珠悬浊液含约10mg磁珠,含有不少于0.6mg GFP抗体,通常可结合不少于1.2mg GFP标签融合蛋白,具体的最大结合量和标签蛋白的分子量大小等相关。每500微升样品,通常仅需使用10-20微升磁珠悬浊液,就可以高效地进行免疫沉淀实验。

▼服务项目

▼实验流程

1.磁珠的准备

1.1 用移液枪轻柔吹打重悬Anti-GFP标签免疫磁珠,转移10-20 μL免疫磁珠到新的离心管中(实际取用量可根据样品中目的蛋白的含量适当增减)。

1.2 加入1ml PBS缓冲液,用移液枪轻柔吹打重悬免疫磁珠,磁力架上静置实现磁液分离后, 移除上清,重复上述步骤2次。

2.样品的结合

2.1 加入500 μL细胞裂解液,室温旋转混匀孵育2小时或者4°C条件下过夜。

2.2 磁力架上静置实现磁液分离后,将上清液转移到新的离心管中备用(上清液可能还有过量的GFP标签目的蛋白)。

3.磁珠洗涤

3.1 加入1mL PBS缓冲液洗涤磁珠,磁力架上静置实现磁液分离后, 移除上清。

3.2 重复洗涤大约3次。

4.目的蛋白洗脱

4.1对于直接检测目的蛋白的情况,在上述所得沉淀中加入50 μL 1×蛋白上样缓冲液,煮沸5 min,在磁力架上静置实现磁液分离后,吸取上转移到新的离心管中。

4.1 取上清进行SDS-PAGE检测。

▼实验案例

▼技术支持

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