核系统酵母文库
▼服务简介
酵母双杂交系统是一种鉴定和检测活细胞内蛋白质相互作用的研究方法,是在真核模式生物酵母中进行的,因其具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点,现已被应用于多个研究领域。
▼应用领域
▼服务流程
▼样本要求
细胞样本:细胞数量大于1×10^7
动物样本:大于1 g
植物样本:大于2 g
总RNA:大于200 µg
▼服务内容
酵母文库构建 |
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基本实验步骤 |
详细实验步骤 |
周期 |
交付材料 |
RNA提取 |
RNA提取 mRNA分离 |
5天 |
酵母双杂文库甘油菌1.5ml EP管(4管) 酵母双杂文库质粒1.5ml EP(4管>400ug) 文库库容量>1*107CFU 平均插入片段0.8 - 1.5 kb (因物种而异) 空载率<5% Word文档电子版项目报告 |
cDNA文库构建 |
cDNA合成与接头连接 cDNA按长度分离 均一化处理(可选) 重组到酵母双杂交载体pGADT7上和电转化 文库检测和质粒提取 数据整理和分析
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21天 |
酵母双杂交文库筛选 |
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基本实验步骤 |
详细实验步骤 |
周期 |
交付材料 |
自激活检测 |
诱饵质粒的自激活检测 |
10天 |
阳性克隆测序结果(根据测序结果而定) Word文档电子版项目报告(含实验数据) |
文库筛选 |
诱饵质粒与文库质粒共转 酵母筛选的条件优化 筛选结果测序
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30天 |
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回转验证 |
筛选结果回转验证 数据整理和分析
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10天 |
阳性克隆酵母质粒 Word文档电子版项目报告(含实验数据) |
酵母双杂交一对一验证 | |||
基本实验步骤 |
详细实验步骤 |
周期 |
交付材料 |
自激活检测 |
诱饵质粒的自激活检测 |
10天 |
阳性克隆酵母菌株 Word文档电子版项目报告 |
一对一验证 |
实验组:pGBKT7-A+pGADT7-B 阳性对照 阴性对照 |
10天 |
▼案例展示
双杂筛选互作验证结果
文献案例
TaTLP1 interacts with TaPR1 to contribute to wheat defense responses to leaf rust fungus
期刊:Plos Genetics(IF:5.174) DOI:10.1371/journal.pgen.1008713
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案例报告