▼技术原理
酵母双杂交系统是一种鉴定活细胞内蛋白质相互作用的研究方法,其原理是:Gal4转录因子由DNA结合域(binding domain,BD)和转录激活域(active domain,AD)组成,二者可以分开独立表达为有功能的蛋白。当二者在物理空间上靠近时可以表现出完整的转录因子活性,基于此,把目的蛋白分别与BD、AD融合表达,当目的蛋白发生互作时,使得BD、AD在物理空间可以靠近,这时就能够表现出完整的转录因子功能,从而激活下游基因的表达。
▼服务简介
酵母双杂是一种利用酵母表达系统分析蛋白质相互作用的技术,它具有高度敏感性和广泛应用性。南京瑞源生物是一家专业从事酵母双杂服务的公司,自成立以来,我们始终致力于提升酵母双杂技术的水平和质量。我们的团队拥有多年的酵母双杂筛选经验,能够根据客户的需求。我们以诚信和专业为原则,对待每一位客户和每一个项目,保证反馈真实可靠的结果和数据。
▼服务优势
质量保证:进行2次筛选(三缺→四缺),保证筛选结果;
交付标注:实验报告、结果图片、高通量测序+GO、KEGG分析、报告解读文档;
测序方式:除一代测序,提供NGS测序与分析,确保全部克隆被鉴定;
生信分析:专业的生信团队进行移码分析(不移码数量≥8),功能注释,GO和KEGG分析;
售后服务:耐心与客户沟通交流,保证交付满意度
▼应用领域
▼服务流程
▼交付展示
▼服务内容
酵母文库构建 |
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基本实验步骤 |
详细实验步骤 |
周期 |
交付材料 |
RNA提取 |
RNA提取 mRNA分离 |
5天 |
酵母双杂文库甘油菌1.5ml EP管(4管) 酵母双杂文库质粒1.5ml EP(4管>400ug) 文库库容量>1*107CFU 平均插入片段0.8 - 1.5 kb (因物种而异) 空载率<5% Word文档电子版项目报告 |
cDNA文库构建 |
cDNA合成与接头连接 cDNA按长度分离 均一化处理(可选) 重组到酵母双杂交载体pGADT7上和电转化 文库检测和质粒提取 数据整理和分析
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21天 |
酵母双杂交文库筛选 |
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基本实验步骤 |
详细实验步骤 |
周期 |
交付材料 |
自激活检测 |
诱饵质粒的自激活检测 |
10天 |
阳性克隆测序结果(根据测序结果而定) Word文档电子版项目报告(含实验数据) |
文库筛选 |
诱饵质粒与文库质粒共转 酵母筛选的条件优化 筛选结果测序
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30天 |
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回转验证 |
筛选结果回转验证 数据整理和分析
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10天 |
阳性克隆酵母质粒 Word文档电子版项目报告(含实验数据) |
酵母双杂交一对一验证 | |||
基本实验步骤 |
详细实验步骤 |
周期 |
交付材料 |
自激活检测 |
诱饵质粒的自激活检测 |
10天 |
阳性克隆酵母菌株 Word文档电子版项目报告 |
一对一验证 |
实验组:pGBKT7-A+pGADT7-B 阳性对照 阴性对照 |
10天 |
▼案例展示
1. 严格的自激活检测与3AT浓度
2. 高标准的回转验证
3. 克隆比对及移码分析
4. 全克隆NGS测序,简单易懂的结果呈现
案例报告