核系统酵母文库
▼技术原理
酵母双杂交系统是一种鉴定活细胞内蛋白质相互作用的研究方法，其原理是：Gal4转录因子由DNA结合域（binding domain，BD）和转录激活域（active domain，AD）组成，二者可以分开独立表达为有功能的蛋白。当二者在物理空间上靠近时可以表现出完整的转录因子活性，基于此，把目的蛋白分别与BD、AD融合表达，当目的蛋白发生互作时，使得BD、AD在物理空间可以靠近，这时就能够表现出完整的转录因子功能，从而激活下游基因的表达。
▼服务简介
酵母双杂是一种利用酵母表达系统分析蛋白质相互作用的技术，它具有高度敏感性和广泛应用性。南京瑞源生物是一家专业从事酵母双杂服务的公司，自成立以来，我们始终致力于提升酵母双杂技术的水平和质量。我们的团队拥有多年的酵母双杂筛选经验，能够根据客户的需求。我们以诚信和专业为原则，对待每一位客户和每一个项目，保证反馈真实可靠的结果和数据。
▼服务优势
质量保证：进行2次筛选（三缺→四缺），保证筛选结果；
交付标注：实验报告、结果图片、高通量测序+GO、KEGG分析、报告解读文档；
测序方式：除一代测序，提供NGS测序与分析，确保全部克隆被鉴定；
生信分析：专业的生信团队进行移码分析（不移码数量≥8），功能注释，GO和KEGG分析；
售后服务：耐心与客户沟通交流，保证交付满意度
▼应用领域
植物
自交不亲和机理研究
病毒
朊蛋白、病毒蛋白相互作用蛋白筛选
信号通路
转录因子、雌激素α受体相互作用蛋白筛选
癌症医学
癌症相关蛋白、凋亡相关蛋白相互作用蛋白筛选
寄生虫医学
毒力因子致病机制研究、半乳糖凝集素互作蛋白筛选
基础原理研究
肌球蛋白、蛋白酶体调节因子相互作用蛋白筛选、受精卵发育
▼服务流程
▼交付展示
▼服务内容
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酵母文库构建 |
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基本实验步骤 |
详细实验步骤 |
周期 |
交付材料 |
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RNA提取 |
RNA提取 mRNA分离 |
5天 |
酵母双杂文库甘油菌1.5ml EP管（4管） 酵母双杂文库质粒1.5ml EP（4管＞400ug） 文库库容量>1*107CFU 平均插入片段0.8 - 1.5 kb (因物种而异) 空载率<5% Word文档电子版项目报告 |
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cDNA文库构建 |
cDNA合成与接头连接 cDNA按长度分离 均一化处理（可选） 重组到酵母双杂交载体pGADT7上和电转化 文库检测和质粒提取 数据整理和分析
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21天 |
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酵母双杂交文库筛选 |
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基本实验步骤 |
详细实验步骤 |
周期 |
交付材料 |
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自激活检测 |
诱饵质粒的自激活检测 |
10天 |
阳性克隆测序结果（根据测序结果而定） Word文档电子版项目报告（含实验数据） |
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文库筛选 |
诱饵质粒与文库质粒共转 酵母筛选的条件优化 筛选结果测序
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30天 |
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回转验证 |
筛选结果回转验证 数据整理和分析
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10天 |
阳性克隆酵母质粒 Word文档电子版项目报告（含实验数据） |
| 酵母双杂交一对一验证 | |||
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基本实验步骤 |
详细实验步骤 |
周期 |
交付材料 |
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自激活检测 |
诱饵质粒的自激活检测 |
10天 |
阳性克隆酵母菌株 Word文档电子版项目报告 |
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一对一验证 |
实验组：pGBKT7-A+pGADT7-B 阳性对照 阴性对照 |
10天 |
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▼案例展示
1. 严格的自激活检测与3AT浓度
2. 高标准的回转验证
3. 克隆比对及移码分析
4. 全克隆NGS测序，简单易懂的结果呈现
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