酵母三杂交系统

酵母三杂交系统

▼服务简介

酵母三杂交技术是由酵母双杂交技术改进而来的,这套系统引进了一个pBrige的质粒,这个质粒的特点是能够同时插入两个外源蛋白,在MCSI插入的蛋白的N端仍然融合Gal4系统中的BD结合域氨基酸多肽片段,而在MCSII中插入的蛋白不融合任何标签,但是在其上游有一个Pmet25启动子,这个启动子的特点是只有在甲硫氨酸(Met)缺乏的时候才能工作,使下游蛋白基因表达,所以必须要在甲硫氨酸缺陷型培养基中进行实验。同样将pBrige质粒转化到Y2HGold菌株中。同时,将第三个蛋白基因克隆到pGADT7载体上,然后转化到AH109酵母菌株中,然后再将这两种菌进行小量结合,其余操作步骤跟酵母双杂交系统一致。唯一的区别就是所有的缺陷型培养基都必须是甲硫氨酸缺陷型的基础上配置。如果这三个蛋白能够发生互作,则能够在五缺培养基(SD/-Met/-Ade/-His/-Leu/-Trp)上生长。

▼实验原理

▼技术优势

酵母三杂交系统操作简单,可用于细胞内核酸水平实验验证,具有比酵母双杂交系统更广泛的应用范围,可通过第三个蛋白使两个杂合蛋白相互靠近,用于研究两个蛋白和第三个蛋白间的相互作用。第三个成分不同,可以是蛋白、RNA或小分子。同时还可以通过菌落生长状态来研究第三个蛋白对其他两蛋白的作用方式(如促进或抑制)。

▼样本要求

    细胞样本:细胞数量大于1×10^7

    动物样本:大于1 g

    植物样本:大于2 g

    总RNA:大于200 µg

▼应用前景

酵母三杂交不仅可以用来研究更为复杂的三个蛋白质间相互作用,而且成为体内研究RNA-蛋白质间相互作用,小分子药物与蛋白质间相互作用的新途径。

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