Y2H筛选抗体

酵母双杂筛选抗体

▼技术简介

  •        单链可变区片段( single-chain fragment variable,scFv) 是由抗体重链的可变区与轻链的可变区在一段肽链的连接下构成的小分子,是具有抗体活性的最小功能结构单位,是目前研究较多、应用较为广泛的重组抗体,其不包含抗体恒定区,但仍表现出与抗原的高亲和力,应用 Y2H 系统在真核细胞酵母内筛选scFv,其产生的抗体有可能保持天然的折叠状态从而更接近体内的真实水平。

▼实验原理

  1. 1.首先构建酵母双杂交体系中的诱饵质粒pGBKT7-bait,将其转化到酵母菌株AH109内,在含有营养缺陷型的培养基中检测其自激活。

    2.提取 bait 蛋白免疫的小鼠脾脏组织总RNA,反转录 PCR 和重叠 PCR 方法构建 VH -linker-VL 型 scFv 基因库。将其与载体 pGADT7 连接

    3.pGADT7-scFV转化至含诱饵载体的AH109酵母菌中,于营养缺陷型平板中筛选阳性克隆。

    4.成功筛选到抗诱饵的 scFv 片段,进行酵母分泌重组抗体表达

    5.采用间接 ELISA 和免疫细胞化学等方法分析进行抗体的亲和特性测定

酵母双杂筛选抗体

▼服务优势

  •        南京瑞源生物具备完备的酵母表达平台和科研团队利用酵母双杂交系统,获得具有良好的亲和力的抗诱饵的scFV,为筛选scFV提供新思路。

▼应用前景

scFv具有分子质量小、穿透力将强、特异性较高等优点,在靶向治疗、影像诊断、细胞内免疫、生物检测等方面有着重要的应用。

 

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