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膜蛋白纳米抗体筛选

膜蛋白纳米抗体筛选

▼服务简介

分裂-泛素酵母双杂交系统筛选纳米抗体

• 分裂-泛素酵母双杂交系统

泛素(ubiquitin)可以分成两部分:N端(Nub)和C端(Cub),Nub和Cub有很强的亲和力。当在同一细胞中同时表达时,Nub和Cub会结合形成完整的泛素,会被泛素蛋白酶(UBPs)识别并切割。Nub第三位的异亮氨酸(I)突变成甘氨酸(G)后,Nub与Cub的亲和力大大降低。诱饵蛋白构建在Cub上,Cub融合转录因子LexA-VP16,猎物构建在NubG上。当诱饵与猎物互作,使得Cub与NubG靠近而形成完整的泛素,被UBPs识别并切割,被切下的转录因子LexA-VP16进入核内,启动报告基因(His,Ade,LacZ)的表达。

 

• 纳米抗体库

纳米抗体是骆驼科动物(骆驼、大羊驼、羊驼及其近亲物种)缺失轻链的天然重链抗体的可变区组成的单域抗体。纳米抗体库中纳米抗体的骨架序列来自IGHV1S1–IGHV1S1S5,通过对PDB数据库中已有的93个纳米抗体序列进行比对,设计如下:对CDR1-3个区进行点随机突变组合,有保守位点,有多样性为2,4或者18的随机位点,其中CDR3区又设计了长度的多态性,有三种长度,分别为12,16,20个氨基酸。

技术优势及应用场景

蛋白质组中约有三分之一是膜蛋白,其中大量膜蛋白具有与疾病相关的功能,开发识别膜蛋白相互作用体的实验方法对现代分子生物学至关重要。分裂-泛素酵母双杂交系统可以在细胞膜识别全长整合膜蛋白、膜结合蛋白以及可溶性蛋白质之间的相互作用,其优势在于它可巧妙的解决膜蛋白之间的相互作用与核报告基因的激活二者在空间上的矛盾;而且NubCub均为小分子肽,只有40个氨基酸,不会对目的蛋白的相互作用造成空间上的障碍。

大多数纳米抗体都来自于骆驼类的免疫,这是一个缓慢而昂贵的过程,需要大量的纯化蛋白质和大型畜牧业和兽医设施。纳米抗体合成库可以直接、快速、低成本地分离纳米抗体。

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利用分裂-泛素酵母双杂交系统筛选NEU1蛋白纳米抗体

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