文章作者：李颖波，宗营杰，刘成洪

发表单位：上海市农业科学院生物技术研究所

发表期刊： 上海农业学报

文献点击下载

文章要点:

研究盐胁迫下植物细胞中的信号途径和蛋白互作网络，将有助于提高对盐胁迫下信号转导途径的认识。相对于其他禾本科作物，大麦对盐的耐受性特别是组织耐受性较强，同时大麦也是遗传学研究中广泛应用的模式作物之一，且在国民经济生产发展中具有十分重要的地位。因此，研究大麦耐盐机制，不仅对我国大麦耐逆育种的进一步发展具有重要的理论意义和应用价值，也对研究其他禾本科作物的耐盐性具有重要的参考价值。

酵母双杂交是利用酵母遗传学分析蛋白质之间相互作用的方法，已广泛用于蛋白质组学、细胞信号转导和功能基因组学等领域。

酵母双杂交不但可以检测已知蛋白之间的相互作用，而且可以发现已知蛋白的互作蛋白，并且可以发现蛋白的新功能。近年来，研究者已在小麦、水稻、大麦、玉米等许多重要农作物中构建了不同组织、器官的酵母双杂交cDNA文库。本实验室前期获得了与盐胁迫相关的E3泛素连接酶基因，拟采用酵母双杂交技术筛选其互作靶蛋白，研究其在大麦耐盐反应中的作用通路。

本研究以盐胁迫下的不同大麦组织为材料，利用Gateway技术构建盐胁迫下的大麦酵母双杂交cDNA文库，以期为深入研究植物应对盐胁迫信号网络提供更多理论支持。高质量酵母双杂交文库是进行大规模互作蛋白筛选，获得阳性互作蛋白的前提。本研究提取了盐胁迫后的大麦根、茎、叶的总RNA，并将其混合后用于构建酵母双杂交cDNA文库，防止了文库中组织特异性表达基因的丢失。评价文库质量有两个重要指标，即cDNA文库的库容量和重组序列的完整性。

本研究分离纯化后得到的mRNA呈弥散状，具有较高的纯度和完整性，保证了后续文库构建质量。酵母双杂交筛选主要有共转化和交配两种方法，其中交配法的效率相对较高。本研究在次级cDNA文库的基础上，构建了大麦酵母双杂交文库，可以较大程度地保证筛选到所有的与靶蛋白具有相互作用的蛋白质分子。