分裂泛素化酵母双杂交系统研究信息素因子 STE2 蛋白相互作用

中文标题:分裂泛素化酵母双杂交系统研究信息素因子 STE2 蛋白相互作用

文章作者:刘小缦  王 群

发表单位:吉林农业大学农学院

中文核心期刊山东农业大学学报

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研究内容

本研究通过膜系统酵母双杂交方法,对信息素因子STE2的互作蛋白进行一对一验证,得到了步验证的与STE2互作的2个蛋白,一个是糖苷水解酶家族蛋白01239,另一个多元运输类蛋白05727。目前,已有许多性别基因控制真菌有性生殖过程的研究,如在酿酒酵母中STE2、G蛋白等调控有性交配的过程。但是有关匍柄霉有性生殖的研究,特别是信息素及相关基因调控MAPK通路的研究少之又少。

本研究初步验证了STE2和01239、05727在酵母中的互作,但是它们二者间的互作在真菌中发挥的生理作用尚不清楚,这为深入研究信息素受体的功能提供了基础以及为后期的CO-IP、Poll-Down实验提供了基础前提。

膜酵母双杂交系统基于分裂的泛素蛋白的重组,泛素是一类标记其他蛋白降解的小而高度保守的蛋白。泛素分子为76个氨基酸的肽链,并具有位于N端(Nub)及C端(Cub)的两个相对独立的结构域,如果这两部分在细胞中分开表达则他们都是部分折叠因此不能被泛素特异性蛋白酶(USPS)识别,如果Nub和Cub在同一细胞中共表达,两个部分依靠彼此之间强烈的亲和性,可以形成完整的泛素蛋白从而被USPS迅速识别并切割。分裂的野生型Nub(Nubl)和cub能通过扩散碰撞模式重新自发折叠成具有生物活性的结构。NubI突变为NubG后,分裂的NubG和Cub没有亲和力不能再以扩散碰撞的模式重新折叠,因此可以利用这个特性将bait蛋白融合到泛素的Cub末端,并在Cub的N端或C端连接一个人工转录因子PLv(por-LeAx-VP16),prey蛋白融合到泛素的N末端上;bait蛋白和prey相互作用时,使得两者相互接近被融合的NubG和Cub重新折叠成完整泛素蛋白被USPS识别切割,而释放转录因子,转录因子转移到细胞核上从而激活报告基因Hsi3和LacZ的表达

研究结果

酵母一对一验证

酵母一对一验证

分裂泛素化酵母双杂交系统研究信息素因子 STE2 蛋白相互作用
本研究通过膜系统酵母双杂交方法,对信息素因子STE2的互作蛋白进行一对一验证,得到了步验证的与STE2互作的2个蛋白,一个是糖苷水解酶家族蛋白01239,另一个多元运输类蛋白05727。目前,已有许多性别基因控制真菌有性生殖过程的研究,如在酿酒酵母中STE2、G蛋白等调控有性交配的过程。但是有关匍柄霉有性生殖的研究,特别是信息素及相关基因调控MAPK通路的研究少之又少。
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