400-863-8520

TEL    025-57671761

在线表单

  • 姓名: *

  • 单位: *

  • 电话: *

  • 邮箱: *

  • 服务项目: *

  • 备注:

  • 提交

  • 验证码
    看不清?换一张
    取消
    确定
图片展示

The Plant Cell|中科院刘宏涛团队揭示了光信号通过COR27和COR28精细调控光形态建成新机制

F

中国科学院分子植物科学卓越创新中心研究员刘宏涛团队在国际学术期刊The Plant Cell(IF:9.618)在线发表了题为“COR27 and COR28 are Novel Regulators of the COP1–HY5 Regulatory Hub and Photomorphogenesis in Arabidopsis”的研究论文,揭示了光信号通过COR27和COR28精细调控光形态建成新机制。

文章来源

为了阐明蓝光稳定COR27和COR28蛋白的机制,我们在拟南芥cDNA文库上进行了酵母双杂交筛选,以鉴定COR27和COR28相互作用蛋白,结果显示COR27和COR28与COP1相互作用,双分子荧光实验也表明COP1与植物细胞中的COR27和COR28相互作用。COP1是光信号转导中的核心抑制因子,通过调控bZIP类转录因子HY5的蛋白稳定性而负调控光形态建成。

图1. COR27和COR28与COP1交互

图1. COR27和COR28与COP1交互

为了研究COR27和COR28是否可能在调节光形态发生中起作用,我们在恒定的白光,长日条件,短日条件或黑暗中生长了Col-0,COR27,COR28,COR27,COR28和过表达COR27或COR28的转基因幼苗。结果表明,COR27和COR28促进下胚轴伸长,并充当蓝光,红光和远红光介导的下胚轴伸长抑制的负调节剂。

图2:COR27和COR28促进下胚轴伸长               

图2:COR27和COR28促进下胚轴伸长

COR27和COR28调节光形态发生和下游延伸相关基因的表达,我们使用酵母双杂交试验测试COR27,COR28和已知参与调节下胚轴伸长的各种蛋白质之间的相互作用,在测试的32种蛋白中,HY5与COR27和COR28相互作用,表明它们可能共同起作用以调节转录和光形态发生。COR27和COR28和HY5共同调控了235个基因,对于这些基因中的53.2%,cor27 cor28双重突变体与hy5具有相反的作用,其中17.9%被HY5促进,但被COR27和COR28抑制,其余35.3%被HY5抑制,但被COR27和COR28促进,这些结果表明,COR27,COR28和HY5以相反的方式作用于大量共同基因的调控。

图3:COR27和COR28与HY5相互作用以调节各种基因的表达

图3:COR27和COR28与HY5相互作用以调节各种基因的表达

 

参考文献

【1】Arabidopsis CAM7 and HY5 physically interact and directly bind to the HY5 promoter to regulate its expression and thereby promote photomorphogenesis. The Plant cell 26, 1036-1052(2014)

【2】Differential expression of RNA-Seq data at the gene level-the DESeq package. European Molecular Biology Laboratory (EMBL)(2013)

【3】Regulatory hierarchy of photomorphogenic loci: allele-specific and light-dependent interaction between the HY5 and COP1 loci. The Plant cell 6, 613-628.(1994)

文章链接:http://www.plantcell.org/content/early/2020/08/07/tpc.20.00195

下载原文

微信公众号二维码

The Plant Cell|中科院刘宏涛团队揭示了光信号通过COR27和COR28精细调控光形态建成新机制
幼苗在黑暗中进行暗形态建成,下胚轴伸长,子叶闭合、黄化,产生顶端弯钩,以便于突破土壤而进入光照环境,见光后迅速开始光形态建成,下胚轴伸长受到抑制,子叶张开并转绿以进行光合作用。
长按图片保存/分享
图片展示

电话:400-863-8520;025-5767-1761

邮箱:order@bestofbest.top

地址:南京市栖霞区江苏生命科技园F7栋

图片展示

微信公众号

图片展示

微信小程序

版权所有 南京瑞源生物技术有限公司       苏ICP备20003978号      技术支持:飞色网络

Copyright © 瑞源生物

苏ICP备20003978号

实验

服务简介
一、酵母单杂交

酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具,被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控,如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等。

 

 二、酵母双杂交

酵母双杂交及系统是一种鉴定和检测活细胞内蛋白质相互作用的研究方法,是在真核模式生物酵母中进行的,因其具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点,现已被应用于多个研究领域。分为膜蛋白和核蛋白双杂交。


应用领域
植物:自交不亲和机理研究

病毒:朊蛋白、病毒蛋白相互作用蛋白筛选

信号通路:转录因子、雌激素α受体相互作用蛋白筛选

癌症医学:癌症相关蛋白、凋亡相关蛋白相互作用蛋白筛选

寄生虫医学:毒力因子致病机制研究、半乳糖凝集素互作蛋白筛选

基础原理研究:肌球蛋白、蛋白酶体调节因子相互作用蛋白筛选、受精卵发育

   

项目名称

内容

交付标准

服务周期

酵母双杂文库构建

RNA提取、反转录、 cDNA处理、基因与载体的连接、文库质粒提取、文库产品指标

酵母双杂交文库甘油菌、酵母双杂交文库质粒、文库构建报告、文库构建图片

25个工作日,如需转化酵母延长15个工作日

酵母双杂文库筛选

诱饵质粒构建与活测、与双杂库共转感受态酵母、文库筛选、阳性克隆鉴定、回转验证

完整的筛库流程实验报告、鉴定出的阳性克隆测序

2个月左右

 

订购信息

 

文库构建流程

总RNA提取——mRNA分离——cDNA合成——基因与载体的连接——文库质粒提取——文库产品指标

单/双杂筛选流程

诱饵质粒构建与活测——与单/双杂库共转感受态酵母——文库筛选——阳性克隆鉴定——回转验证——报告整理

 

样品要求
细胞样本:细胞数量大于1×10^7;动物样本:大于1 g;植物样本:大于2 g;总RNA:大于200 µg
筛选服务:客户提供诱饵基因或构建好的诱饵质粒

 案例分析

1载体构建
根据客户提供序列构建 BD 重组载体,进行引物设计和测序验证。
2自激活检测结果

  

                                     pGADT7-LargeT/pGBKT7-p53 为阳性对照

                               pGADT7-LargeT/pGBKT7-LaminC 为阴性对照

实验现象结论

对照菌株在 SD-TL 缺陷平板上都能正常生长,而仅有阳性对照可在 SD-TLHA缺陷平板生长。pGADT7+pGBKT7-ABC 转化子中随机挑选的 6 个菌落在 SD-TLHA 缺陷平板上不能生长,生长状态同阴性对照,因此不存在自激活。

结果:ABC 诱饵克隆没有自激活作用。

3文库筛选

4阳性克隆鉴定

 

      筛库阳性克隆 ADE2 和 HIS3 报告基因检测

编号 1-34 分别是筛到的 34 个初始阳性克隆,编号“+”为阳性对照,编号“-”为阴性对照。

 

在 ADE2 和 HIS3 报告基因的检测结果中,可以看到,阳性对照在SD-TL和SD-TLHA 都能正常生长,而阴性对照由于不会激活 ADE2 和 HIS3 报告基因,在 SD-TL 可以正常生长,但在缺少 Histidine 和 Adenine 这两种成分的 SD-TLHA 平板上不能生长。因此,在34个初始阳性克隆中,除 4、8、26、28、30、32、33、34 号之外均能在SD-TLHA 生长,表明激活了HIS3和ADE2 报告基因。

 

5)回转验证

 

阳性克隆回转验证 His Ade 报告基因检测

 

15 种阳性克隆在SD-TLSD-TLHA 缺陷平板的生长情况。标注“+”为阳性对照,标注“-”为阴性对照。

 

结果显示,15 个阳性克隆中 22 号不能激活 HIS3 ADE2 报告基因;其余均能激活 HIS3 ADE2 报告基因。

 

联系电话
400-8638520
联系电话
025-57671761
二维码
二维码