400-863-8520

TEL    025-57671761

在线表单

  • 姓名: *

  • 单位: *

  • 电话: *

  • 邮箱: *

  • 服务项目: *

  • 备注:

  • 提交

  • 验证码
    看不清?换一张
    取消
    确定
图片展示

Nucleic Acids Research|浙江大学华跃进教授团队发现RecJ参与DNA碱基切除修复途径

2020年9月1日,国际知名期刊《Nucleic Acids Research(IF:11.501)在线发表了浙江大学生命科学学院华跃进教授团队题为“Participation of RecJ in the base excision repair pathway of Deinococcus radiodurans”的研究论文。程凯莹博士和博士生徐颖为共同第一作者。

文章来源


耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans)是一类耐受强烈电离辐射、化学诱变剂等压力胁迫的极端微生物,具有强大的DNA损伤修复能力,是研究DNA损伤修复的模式生物。碱基切除修复(Base Excision Repair, BER)为其中一种DNA损伤修复途径,其主要过程为首先糖基化酶识别和移除受到损伤的碱基,随后AP(apurinic/apyrimidinic)核酸内切酶或者dRP(5’-deoxyribose-phosphate)裂解酶会把无碱基核苷酸的糖苷-磷酸键切开,短片段碱基切除修复途径中,DNA聚合酶合成一个正确的核苷酸,而长片段碱基切除修复途径中,DNA聚合酶将合成一段核苷酸,被置换的链由flap核酸内切酶或5’-3’核酸外切酶降解,这两种途径最后都由DNA连接酶连接缺口。先前研究表明D. radiodurans中的RecJ,5’-3’单链DNA核酸外切酶,可能降解碱基切除修复过程中的无碱基核苷酸。但对其具体降解机制尚不清楚。


本研究通过X射线衍射的方法解析了耐辐射奇球菌RecJ蛋白(drRecJ)与含有类dRP的单链DNA的复合物结构,揭示了drRecJ的5’-单磷酸结合袋和催化核心中5’-dRP的存在。通过相应的生化实验,研究了RecJ 的5’-dRP降解机制,暗示drRecJ并不是传统意义上的5’-dRP裂解酶。同时体外重建实验表明drRecJ倾向于参与长片段BER途径而不是短片段BER途径。这些结果表明,RecJ参与DNA碱基切除修复途径。

文章来源于浙江大学,如有侵权请联系删除。


论文链接:

https://academic.oup.com/nar/advance-article/doi/10.1093/nar/gkaa714/5900117

参考文献:

【1】Sancar,A. (1996) DNA excision repair. Annu. Rev. Biochem., 65,43–81.

【2】Cunningham,R.P . (1997) DNA glycosylases. Mutat. Res., 383,189–196

【3】McCullough,A.K., Dodson,M.L. and Lloyd,R.S. (1999) Initiation ofbase excision repair: glycosylase mechanisms and structures. Annu.Rev. Biochem., 68, 255–285.

阅读原文

微信公众号二维码

Nucleic Acids Research|浙江大学华跃进教授团队发现RecJ参与DNA碱基切除修复途径
耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans)是一类耐受强烈电离辐射、化学诱变剂等压力胁迫的极端微生物,具有强大的DNA损伤修复能力,是研究DNA损伤修复的模式生物。碱基切除修复(Base Excision Repair, BER)为其中一种DNA损伤修复途径,其主要过程为首先糖基化酶识别和移除受到损伤的碱基,随后AP(apurinic/apyrimidinic)核酸内切酶或者dR
长按图片保存/分享
图片展示

电话:400-863-8520;025-5767-1761

邮箱:order@bestofbest.top

地址:南京市栖霞区江苏生命科技园F7栋

图片展示

微信公众号

图片展示

微信小程序

版权所有 南京瑞源生物技术有限公司       苏ICP备20003978号      技术支持:飞色网络

Copyright © 瑞源生物

苏ICP备20003978号

实验

服务简介
一、酵母单杂交

酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具,被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控,如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等。

 

 二、酵母双杂交

酵母双杂交及系统是一种鉴定和检测活细胞内蛋白质相互作用的研究方法,是在真核模式生物酵母中进行的,因其具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点,现已被应用于多个研究领域。分为膜蛋白和核蛋白双杂交。


应用领域
植物:自交不亲和机理研究

病毒:朊蛋白、病毒蛋白相互作用蛋白筛选

信号通路:转录因子、雌激素α受体相互作用蛋白筛选

癌症医学:癌症相关蛋白、凋亡相关蛋白相互作用蛋白筛选

寄生虫医学:毒力因子致病机制研究、半乳糖凝集素互作蛋白筛选

基础原理研究:肌球蛋白、蛋白酶体调节因子相互作用蛋白筛选、受精卵发育

   

项目名称

内容

交付标准

服务周期

酵母双杂文库构建

RNA提取、反转录、 cDNA处理、基因与载体的连接、文库质粒提取、文库产品指标

酵母双杂交文库甘油菌、酵母双杂交文库质粒、文库构建报告、文库构建图片

25个工作日,如需转化酵母延长15个工作日

酵母双杂文库筛选

诱饵质粒构建与活测、与双杂库共转感受态酵母、文库筛选、阳性克隆鉴定、回转验证

完整的筛库流程实验报告、鉴定出的阳性克隆测序

2个月左右

 

订购信息

 

文库构建流程

总RNA提取——mRNA分离——cDNA合成——基因与载体的连接——文库质粒提取——文库产品指标

单/双杂筛选流程

诱饵质粒构建与活测——与单/双杂库共转感受态酵母——文库筛选——阳性克隆鉴定——回转验证——报告整理

 

样品要求
细胞样本:细胞数量大于1×10^7;动物样本:大于1 g;植物样本:大于2 g;总RNA:大于200 µg
筛选服务:客户提供诱饵基因或构建好的诱饵质粒

 案例分析

1载体构建
根据客户提供序列构建 BD 重组载体,进行引物设计和测序验证。
2自激活检测结果

  

                                     pGADT7-LargeT/pGBKT7-p53 为阳性对照

                               pGADT7-LargeT/pGBKT7-LaminC 为阴性对照

实验现象结论

对照菌株在 SD-TL 缺陷平板上都能正常生长,而仅有阳性对照可在 SD-TLHA缺陷平板生长。pGADT7+pGBKT7-ABC 转化子中随机挑选的 6 个菌落在 SD-TLHA 缺陷平板上不能生长,生长状态同阴性对照,因此不存在自激活。

结果:ABC 诱饵克隆没有自激活作用。

3文库筛选

4阳性克隆鉴定

 

      筛库阳性克隆 ADE2 和 HIS3 报告基因检测

编号 1-34 分别是筛到的 34 个初始阳性克隆,编号“+”为阳性对照,编号“-”为阴性对照。

 

在 ADE2 和 HIS3 报告基因的检测结果中,可以看到,阳性对照在SD-TL和SD-TLHA 都能正常生长,而阴性对照由于不会激活 ADE2 和 HIS3 报告基因,在 SD-TL 可以正常生长,但在缺少 Histidine 和 Adenine 这两种成分的 SD-TLHA 平板上不能生长。因此,在34个初始阳性克隆中,除 4、8、26、28、30、32、33、34 号之外均能在SD-TLHA 生长,表明激活了HIS3和ADE2 报告基因。

 

5)回转验证

 

阳性克隆回转验证 His Ade 报告基因检测

 

15 种阳性克隆在SD-TLSD-TLHA 缺陷平板的生长情况。标注“+”为阳性对照,标注“-”为阴性对照。

 

结果显示,15 个阳性克隆中 22 号不能激活 HIS3 ADE2 报告基因;其余均能激活 HIS3 ADE2 报告基因。

 

联系电话
400-8638520
联系电话
025-57671761
二维码
二维码