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中国科学院植物研究所酵母单杂交文库筛选客户案列展示
作者：南京瑞源生物技术有限公司
浏览：
发表时间：2020-10-09 10:18:34
公司承诺
1
文库质量评估
理论+涂板评价
交付材料：反馈质量评估结果
2
载体构建
基因合成诱饵基因
构建Phis2载体
交付材料：含诱饵基因的质粒
3
启动子背景筛查
Binding seq基因启动子的背景筛查
交付材料：阳性克隆测序结果
word项目报告
4
文库筛选
诱饵质粒转化和文库质粒转化
酵母筛选和3AT条件优化
筛选结果测序
交付材料：阳性克隆测序结果
word项目报告
5
回转验证
筛选结果回转验证
数据整理和分析
交付材料：阳性克隆酵母质粒
word项目报告
实验结果
自激活检测
不同浓度3AT平板启动子自激活检测结果
实验结论
阳性对照由于HIS3报告基因的激活，在添加3AT抑制剂的平板上能正常生长不受影响，转化子数量与不添加3AT相同，但是实际观察到的生长值是比不添加3AT的平板约有10%的降低，并且随着3AT浓度增加，生长率会降低，但与阴性对照仍然有显著差别。
阳性克隆回转验证His和Ade报告基因的检测
筛库阳性克隆His3报告基因检测结果
实验结论
提取阳性酵母DNA后与GenBank数据库中的序列进行BLAST比对分析，共筛选到43个阳性克隆
在HIS3报告基因的检测结果中，可以看到，阳性对照、阴性对照在SD-TL、SD-TLH + 10 mM 3AT均能正常生长。注：阴性对照3AT的抑制浓度为50mM,所以可以在10mM3AT浓度的平板上生长。
在43个初始克隆阳性克隆中，在SD-TL、SD-TLH + 10 mM 3AT均能正常生长，结果表明这43个克隆与启动子pHIS2-ZT存在互作。
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