400-863-8520

TEL    025-57671761

图片展示

Plant physiology |扬州大学梁国华课题组揭示精胺合酶OsSPMS1调节种子发芽,籽粒大小和产量

多胺是一类具有很强生物活性的低分子量脂肪族阳离子,广泛存在于原核和真核生物中。多胺代谢是最后一个普遍共同祖先中存在的原始代谢途径之一,对真核生物、古细菌和许多细菌的细胞扩增和生长至关重要。因此,多胺生物合成通常被用作分析生物合成多样性的基本进化机制的例子,包括基因复制、水平基因转移、基因融合和基因丢失。然而,参与多胺合成的基因机制以及水稻生长和产量生产的调控仍然难以捉摸。

 

扬州大学农学院梁国华团队在期刊《Plant Physiology》上发表文章”The Spermine Synthase OsSPMS1 Regulates Seed Germination, Grain Size, and Yield”,文章揭示OsSPMS1基因在亚精胺转化为精胺(SPM)中起重要作用,并且它也影响1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)和乙烯的合成。文章中多胺检测内容由南京瑞源生物技术有限公司提供。

OsSPMS1蛋白的表达模式和亚细胞定位

由四个预测的水稻SPDS / SPMS编码基因编码的蛋白质的功能尚未鉴定。在这项研究中,研究人员调查了OsSPMS1在水稻中的作用。逆转录定量PCR(RT-qPCR)分析表明,OsSPMS1在叶,节,鞘,根,茎和穗中组成性表达,在叶中的表达水平最高。在穗发育的早期阶段,OsSPMS1的表达水平随穗伸长而增加,但在到达顶峰后显着下降。为了进一步了解OsSPMS1的表达谱,OsSPMS1的1.9-kb启动子区克隆OsSPMS1以驱动GUS基因,并将启动子-GUS构建体转化到水稻植株中。GUS染色表明,OsSPMS1在叶,节,茎和鞘中大量表达;而OsSPMS1在叶,节,茎和鞘中大量表达。它在根中也有表达,在根尖有特别强的染色。我们还比较了不同发育阶段穗间的GUS活性,并观察到与RT-qPCR数据相似的结果。

OsSPMS1的组织特异性表达和亚细胞定位

 

OsSPMS1影响多胺合成

在植物中,SPDS催化从Put到Spd的转化,然后可以通过SPMS将其转化为Spm。为了验证OsSPMS1是否影响多胺的合成,研究人员在抽穗期检测到旗叶中的多胺含量。OsSPMS1的下调导致内源性put和Spm但在spd含量的增加。OsSPMS1的过度表达导致Spd的大量消耗和Put的积累。但是,野生型和OE植物之间的Spm含量没有显着差异。我们还计算了Spm与Spd的比率,与野生型相比,在两个RNAi系中显着降低,在两个OE系中极度升高。另外,OsSPMS1的表达可以被Spd迅速诱导并被Spm抑制,但在Put处理后并没有改变。基于这些发现,研究人员提出OsSPMS1可以消耗Spd并起到SPMS的作用,OsSPMS1影响乙烯体内平衡以调节种子萌发和根冠发育。


野生型(WT)和转基因植物中内源多胺含量的比较

 

在这项研究中,研究人员在功能上表征了OsSPMS1基因,该基因可能编码水稻中的SPMS。所述OsSPMS1基因在亚精胺转化为精胺(SPM)中起重要作用,并且它也影响1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)和乙烯的合成。OsSPMS1基因的操纵对多种性状具有实质性影响,包括植物高度,籽粒大小,种子发芽和产量产生。更重要的是,敲除OsSPMS1可以进一步提高高产品种的谷物产量,这表明OsSPMS1是提高水稻产量的关键目标基因。

原文链接:http://www.plantphysiol.org/content/178/4/1522

阅读原文

 

Plant physiology |扬州大学梁国华课题组揭示精胺合酶OsSPMS1调节种子发芽,籽粒大小和产量
多胺是一类具有很强生物活性的低分子量脂肪族阳离子,广泛存在于原核和真核生物中。多胺代谢是最后一个普遍共同祖先中存在的原始代谢途径之一,对真核生物、古细菌和许多细菌的细胞扩增和生长至关重要。因此,多胺生物合成通常被用作分析生物合成多样性的基本进化机制的例子,包括基因复制、水平基因转移、基因融合和基因丢失。然而,参与多胺合成的基因机制以及水稻生长和产量生产的调控仍然难以捉摸。
长按图片保存/分享
图片展示

电话:400-863-8520;025-5767-1761

邮箱:order@bestofbest.top

地址:南京市栖霞区江苏生命科技园F7栋

图片展示

微信公众号

图片展示

微信小程序

版权所有 南京瑞源生物技术有限公司       苏ICP备20003978号      技术支持:飞色网络

Copyright © 瑞源生物

苏ICP备20003978号

实验

服务简介
一、酵母单杂交

酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具,被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控,如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等。

 

 二、酵母双杂交

酵母双杂交及系统是一种鉴定和检测活细胞内蛋白质相互作用的研究方法,是在真核模式生物酵母中进行的,因其具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点,现已被应用于多个研究领域。分为膜蛋白和核蛋白双杂交。


应用领域
植物:自交不亲和机理研究

病毒:朊蛋白、病毒蛋白相互作用蛋白筛选

信号通路:转录因子、雌激素α受体相互作用蛋白筛选

癌症医学:癌症相关蛋白、凋亡相关蛋白相互作用蛋白筛选

寄生虫医学:毒力因子致病机制研究、半乳糖凝集素互作蛋白筛选

基础原理研究:肌球蛋白、蛋白酶体调节因子相互作用蛋白筛选、受精卵发育

   

项目名称

内容

交付标准

服务周期

酵母双杂文库构建

RNA提取、反转录、 cDNA处理、基因与载体的连接、文库质粒提取、文库产品指标

酵母双杂交文库甘油菌、酵母双杂交文库质粒、文库构建报告、文库构建图片

25个工作日,如需转化酵母延长15个工作日

酵母双杂文库筛选

诱饵质粒构建与活测、与双杂库共转感受态酵母、文库筛选、阳性克隆鉴定、回转验证

完整的筛库流程实验报告、鉴定出的阳性克隆测序

2个月左右

 

订购信息

 

文库构建流程

总RNA提取——mRNA分离——cDNA合成——基因与载体的连接——文库质粒提取——文库产品指标

单/双杂筛选流程

诱饵质粒构建与活测——与单/双杂库共转感受态酵母——文库筛选——阳性克隆鉴定——回转验证——报告整理

 

样品要求
细胞样本:细胞数量大于1×10^7;动物样本:大于1 g;植物样本:大于2 g;总RNA:大于200 µg
筛选服务:客户提供诱饵基因或构建好的诱饵质粒

 案例分析

1载体构建
根据客户提供序列构建 BD 重组载体,进行引物设计和测序验证。
2自激活检测结果

  

                                     pGADT7-LargeT/pGBKT7-p53 为阳性对照

                               pGADT7-LargeT/pGBKT7-LaminC 为阴性对照

实验现象结论

对照菌株在 SD-TL 缺陷平板上都能正常生长,而仅有阳性对照可在 SD-TLHA缺陷平板生长。pGADT7+pGBKT7-ABC 转化子中随机挑选的 6 个菌落在 SD-TLHA 缺陷平板上不能生长,生长状态同阴性对照,因此不存在自激活。

结果:ABC 诱饵克隆没有自激活作用。

3文库筛选

4阳性克隆鉴定

 

      筛库阳性克隆 ADE2 和 HIS3 报告基因检测

编号 1-34 分别是筛到的 34 个初始阳性克隆,编号“+”为阳性对照,编号“-”为阴性对照。

 

在 ADE2 和 HIS3 报告基因的检测结果中,可以看到,阳性对照在SD-TL和SD-TLHA 都能正常生长,而阴性对照由于不会激活 ADE2 和 HIS3 报告基因,在 SD-TL 可以正常生长,但在缺少 Histidine 和 Adenine 这两种成分的 SD-TLHA 平板上不能生长。因此,在34个初始阳性克隆中,除 4、8、26、28、30、32、33、34 号之外均能在SD-TLHA 生长,表明激活了HIS3和ADE2 报告基因。

 

5)回转验证

 

阳性克隆回转验证 His Ade 报告基因检测

 

15 种阳性克隆在SD-TLSD-TLHA 缺陷平板的生长情况。标注“+”为阳性对照,标注“-”为阴性对照。

 

结果显示,15 个阳性克隆中 22 号不能激活 HIS3 ADE2 报告基因;其余均能激活 HIS3 ADE2 报告基因。

 

联系电话
400-8638520
联系电话
025-57671761
二维码
二维码