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酵母展示项目环境影响报告表全本公示

 发布单位:南京瑞源生物技术有限公司,上海同济环保咨询有限公司

发布日期:2020年10月27日

相关链接:环境影响报告表


1、说明

上海同济环保咨询有限公司接受南京瑞源生物技术有限公司委托,开展“酵母展示”项目环境影响报告表编制。现依据《建设项目环境影响评价政府信息公开指南(试行)》(环办[2013]103号),并经建设单位同意向公众公开环境影响报告表内容。


2、建设项目概述

项目名称:酵母展示;

建设单位:南京瑞源生物技术有限公司;

建设地点:南京市栖霞区仙林街道纬地路9号江苏生命科技创新园F7幢304、306、308室;

建设内容:瑞源生物拟投资300万元,租赁江苏生命科技创新园F7幢304、306、308室,建设酵母展示研发项目。本项目主要进行生物技术研发,不涉及生产,同时不涉及P3、P4生物实验、不涉及活体动物实验、生物基因工程、重金属及有严重异味物质的实验。研发产品在研发完成后均作为固体废物处置。本项目现已取得南京市栖霞区行政审批局备案,栖行审备〔2020〕162号。


3、酵母展示环境影响报告表

(1)环境影响报告表:见链接;

(2)公示期限:2020年10月27日至2020年11月2日。


4、征求公众意见的主要事项

本次公示主要征求公众对项目酵母展示研发过程中重点关心的问题;项目建成后可能产生的污染对环境影响的建议;对本次公众意见调查工作的建议。


5、公众提出意见的主要方式

公众可通过发送电子邮件、信函等方式,表达关于对该项目建设及胶体金试剂盒研发过程工作的意见看法(仅接受与胶体金试剂盒研发有关的问题)。联系方式(南京市江北新区星火路20号星火E方1幢1002室,李 13083010831,1433442604@qq.com),公众发表意见请留下您的真实姓名及基本情况(单位或住址,联系方式等),以便根据需要反馈,必要时进行回访。

酵母展示项目环境影响报告表全本公示
上海同济环保咨询有限公司接受南京瑞源生物技术有限公司委托,开展“酵母展示”项目环境影响报告表编制。现依据《建设项目环境影响评价政府信息公开指南(试行)》(环办[2013]103号),并经建设单位同意向公众公开环境影响报告表内容。
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实验

服务简介
一、酵母单杂交

酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具,被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控,如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等。

 

 二、酵母双杂交

酵母双杂交及系统是一种鉴定和检测活细胞内蛋白质相互作用的研究方法,是在真核模式生物酵母中进行的,因其具有灵敏性高、功能强大、适用范围广等特点,现已被应用于多个研究领域。分为膜蛋白和核蛋白双杂交。


应用领域
植物:自交不亲和机理研究

病毒:朊蛋白、病毒蛋白相互作用蛋白筛选

信号通路:转录因子、雌激素α受体相互作用蛋白筛选

癌症医学:癌症相关蛋白、凋亡相关蛋白相互作用蛋白筛选

寄生虫医学:毒力因子致病机制研究、半乳糖凝集素互作蛋白筛选

基础原理研究:肌球蛋白、蛋白酶体调节因子相互作用蛋白筛选、受精卵发育

   

项目名称

内容

交付标准

服务周期

酵母双杂文库构建

RNA提取、反转录、 cDNA处理、基因与载体的连接、文库质粒提取、文库产品指标

酵母双杂交文库甘油菌、酵母双杂交文库质粒、文库构建报告、文库构建图片

25个工作日,如需转化酵母延长15个工作日

酵母双杂文库筛选

诱饵质粒构建与活测、与双杂库共转感受态酵母、文库筛选、阳性克隆鉴定、回转验证

完整的筛库流程实验报告、鉴定出的阳性克隆测序

2个月左右

 

订购信息

 

文库构建流程

总RNA提取——mRNA分离——cDNA合成——基因与载体的连接——文库质粒提取——文库产品指标

单/双杂筛选流程

诱饵质粒构建与活测——与单/双杂库共转感受态酵母——文库筛选——阳性克隆鉴定——回转验证——报告整理

 

样品要求
细胞样本:细胞数量大于1×10^7;动物样本:大于1 g;植物样本:大于2 g;总RNA:大于200 µg
筛选服务:客户提供诱饵基因或构建好的诱饵质粒

 案例分析

1载体构建
根据客户提供序列构建 BD 重组载体,进行引物设计和测序验证。
2自激活检测结果

  

                                     pGADT7-LargeT/pGBKT7-p53 为阳性对照

                               pGADT7-LargeT/pGBKT7-LaminC 为阴性对照

实验现象结论

对照菌株在 SD-TL 缺陷平板上都能正常生长,而仅有阳性对照可在 SD-TLHA缺陷平板生长。pGADT7+pGBKT7-ABC 转化子中随机挑选的 6 个菌落在 SD-TLHA 缺陷平板上不能生长,生长状态同阴性对照,因此不存在自激活。

结果:ABC 诱饵克隆没有自激活作用。

3文库筛选

4阳性克隆鉴定

 

      筛库阳性克隆 ADE2 和 HIS3 报告基因检测

编号 1-34 分别是筛到的 34 个初始阳性克隆,编号“+”为阳性对照,编号“-”为阴性对照。

 

在 ADE2 和 HIS3 报告基因的检测结果中,可以看到,阳性对照在SD-TL和SD-TLHA 都能正常生长,而阴性对照由于不会激活 ADE2 和 HIS3 报告基因,在 SD-TL 可以正常生长,但在缺少 Histidine 和 Adenine 这两种成分的 SD-TLHA 平板上不能生长。因此,在34个初始阳性克隆中,除 4、8、26、28、30、32、33、34 号之外均能在SD-TLHA 生长,表明激活了HIS3和ADE2 报告基因。

 

5)回转验证

 

阳性克隆回转验证 His Ade 报告基因检测

 

15 种阳性克隆在SD-TLSD-TLHA 缺陷平板的生长情况。标注“+”为阳性对照,标注“-”为阴性对照。

 

结果显示,15 个阳性克隆中 22 号不能激活 HIS3 ADE2 报告基因;其余均能激活 HIS3 ADE2 报告基因。

 

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