1）载体构建
根据客户提供序列构建 BD 重组载体，进行引物设计和测序验证。
2）自激活检测结果

                                     pGADT7-LargeT/pGBKT7-p53 为阳性对照

                               pGADT7-LargeT/pGBKT7-LaminC 为阴性对照

实验现象结论

对照菌株在 SD-TL 缺陷平板上都能正常生长，而仅有阳性对照可在 SD-TLHA缺陷平板生长。pGADT7+pGBKT7-ABC 转化子中随机挑选的 6 个菌落在 SD-TLHA 缺陷平板上不能生长，生长状态同阴性对照，因此不存在自激活。

结果：ABC 诱饵克隆没有自激活作用。

3）文库筛选

4）阳性克隆鉴定

      筛库阳性克隆 ADE2 和 HIS3 报告基因检测

编号 1-34 分别是筛到的 34 个初始阳性克隆，编号“+”为阳性对照，编号“-”为阴性对照。

在 ADE2 和 HIS3 报告基因的检测结果中，可以看到，阳性对照在SD-TL和SD-TLHA 都能正常生长，而阴性对照由于不会激活 ADE2 和 HIS3 报告基因，在 SD-TL 可以正常生长，但在缺少 Histidine 和 Adenine 这两种成分的 SD-TLHA 平板上不能生长。因此，在34个初始阳性克隆中，除 4、8、26、28、30、32、33、34 号之外均能在SD-TLHA 生长，表明激活了HIS3和ADE2 报告基因。

5）回转验证

阳性克隆回转验证 His 和 Ade 报告基因检测

15 种阳性克隆在SD-TL和SD-TLHA 缺陷平板的生长情况。标注“+”为阳性对照，标注“-”为阴性对照。

结果显示，15 个阳性克隆中 22 号不能激活 HIS3 和 ADE2 报告基因；其余均能激活 HIS3 和 ADE2 报告基因。