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1、为何合成两条含有插入序列的引物?共有3×47即49512种序列。2、为何仅仅构建随机序列为7bp的文库?因为对于新的元件需要确定边界,插入序列越长,确定边界工作量越大。这样可以减少确定新元件边界的工作量。3、为何将随机序列插入SmaI酶切位点?因为其酶切序列为CCCGGG,这个序列正好可以作为识别插入序列的标记位点,即形成了CCCHNNNNNNCGGG,CCC和GGG为标记位点。