1、SYBR-Green染料法与TaqMan荧光探针法，这两种荧光定量PCR方法有什么区别？

SYBR-Green染料法：染料能够与双链结合，当PCR扩增的时候，能特异性地渗入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射荧光信号，从而保证荧光信号与PCR产物的增加完全同步。适用于任何DNA，无需设计探针，采取双标准曲线法，实验周期短，结果重复性好，灵敏度高。

TaqMan荧光探针法：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。经验丰富的实验技术人员设计探针，对目标基因有高特异性，实验重复性好，相对于SYBR Green法，灵敏度更高。

2、客户除了提供样品外，还需要提供哪些信息？

样品类型：组织/细胞/RNA/cDNA；

物种信息

目的基因的序列、GeneBank编号；客户提供引物序列（需要备注序列来源，不保证能检测），或者直接提供引物；

内参基因；对照组。

3、提供对照组为什么还需要提供内参？

很多客户都会有这样的疑惑，为什么我已经提供给你们对照组，为什么还要确定内参基因？

在QPCR中，需要加入内参基因校准正，消除不同样本在RNA产量、质量以及逆转录上可能存在的差别，从而获得目的基因特异性表达的真正差异。在Q的实验数据分析中计算的是相对表达量，是以客户指定的样品为标准进行相对定量数据分析，而客户指定的样品即为对照组。