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AMB Express|日本学者优化并揭示了利用酵母表面展示技术筛选纳米抗体的系统平台

作者:南京瑞源生物技术有限公司 浏览: 发表时间:2022-06-29 09:40:01

酵母表面展示是一种强大的技术,用于分离和改造蛋白质以提高其活性、特异性和稳定性。在该方法中,基因表达受启动子调控,分泌效率受分泌信号影响。此外,展示蛋白质的可及性和活性都受锚蛋白长度的影响。



日本学者在AMB Express期刊上发表了一篇名为” Evaluation of the yeast surface display system for screening of functional nanobodies”文章揭示了利用酵母表面展示技术筛选纳米抗体的系统平台。

理想的启动子、分泌信号和锚蛋白组合取决于感兴趣的蛋白质。在这项研究中,我们优化了适用于纳米体评估的酵母表面展示。我们设计了五种展示系统,它们使用了不同的启动子、分泌信号和锚蛋白组合。抗母鸡蛋白溶菌酶纳米体用作模型纳米体。显示在酵母细胞上的纳米抗体的数量,对与展示的纳米抗体结合的抗原数量和展示效率进行了量化。总体而言,我们改进了用于纳米体工程的酵母展示系统并提出了优化建议。

为了比较展示系统,我们试图确定它们的最佳培养条件。抗溶菌酶纳米体菌株和对照菌株均在25°C或30°C培养24小时。在每个采样点,对酵母细胞进行染色并进行流式细胞术分析(图 2a  )。对照菌株对抗HA标签抗体和AF647标记的溶菌酶几乎没有非特异性吸收(图 2b)。在时程分析中,几乎所有系统在 Q2 区域中酵母细胞的最高比例都在12小时内(图 2c-g)。因此,在培养 12 小时后比较了五个展示系统。


图2 培养条件对展示效率的影响

在这项研究中,我们试图建立一种适用于纳米抗体的酵母展示系统。我们设计了五个展示系统来研究不同启动子、分泌信号、锚定蛋白和培养温度的影响。我们量化了酵母细胞上展示的纳米抗体的数量、与展示的纳米抗体结合的抗原数量以及展示效率,并观察到这些主要终点的值在很大程度上取决于参数。

总之,本研究检查了有关纳米抗体酵母表面展示的各种关键参数。在考虑评估纳米体文库制备的条件时,有两点很重要:首先,产生正确折叠的纳米体的酵母比例应该很高,其次,应该对每个突变体的结合能力进行精细评估。在此,显示在GAL1启动子下的展示效率高,并且在GAL1启动子下展示的纳米抗体的量少于在GAP启动子下的展示量。因此,预计在GAL1下亲合力效应会降低发起人。因此,我们可以评估亲和力,即展示的纳米抗体与其抗原的单一相互作用的强度。此外,我们证实了使用α前pro信号提高了纳米抗体的抗原结合能力,并且通过长锚蛋白提高了可接近性。总体而言,本研究中获得的知识将使我们能够在未来评估纳米抗体的制备。


AMB Express|日本学者优化并揭示了利用酵母表面展示技术筛选纳米抗体的系统平台
酵母表面展示是一种强大的技术,用于分离和改造蛋白质以提高其活性、特异性和稳定性。在该方法中,基因表达受启动子调控,分泌效率受分泌信号影响。此外,展示蛋白质的可及性和活性都受锚蛋白长度的影响。
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