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启动子文库工作菌液
▼产品简介
本产品由长度为7 bp的启动子片段和pHIS2 （Smal-lineared）载体同源重组构建文库质粒，含有多个克隆位点和限制性内切酶，可用TF centered Y1H筛库，筛选与转录因子互作的核心位点。
▼产品规格
| 名称 | 货号 | 组成成分 | 规格 |
| 启动子文库工作菌液 | RY8006 | 启动子文库酵母工作菌液 | 4ml（4支，1ml/支） |
| 说明书 | 份，纸质版 |
保存条件
-80℃~-70℃保存，运输条件：干冰。
产品标准
文库库容量>1*108
重组率>95%
空载率<5%
▼产品优势
效率高
成本低
使用操作简易
可应对复杂样本
▼载体信息
▼实验指南
用含有pHIS2-启动子质粒的酵母工作菌液制备感受态，将pGADT7-诱饵质粒DNA转入其中，涂相应的筛选平板。
1. 冰上融化启动子文库酵母工作菌液，接于液体SD-T培养基50 ml，30℃，225 rpm，振荡培养24 h。
2. 转接于YPDA液体500 ml，使初始OD600=0.2，30℃，225 rpm，振荡培养4-5 h，至OD600=0.6。
3.离心收菌，室温，4000 rpm，5 min。
4.用30 ml无菌水重悬菌体，混匀，离心收菌，室温，4000 rpm，5 min，弃上清。
5.用20 ml 0.1M LiAc重悬菌体，混匀，离心收菌，室温，4000 rpm，5 min，弃上清。
6.用10 ml 0.1M LiAc重悬菌体，混匀，离心收菌，室温，4000 rpm ，5 min，弃上清。
7.向离心管中依次加入如下试剂，用枪头吹打混匀，或剧烈振荡1 min左右，至完全混匀。
|
50%PEG3350 |
1 M LiAc |
ssDNA (10 mg/ml) |
诱饵质粒DNA |
|
9.6 ml |
1.44 ml |
300 ul |
25 ug |
8. 30℃水浴孵育，30 min。
9. 42℃水浴热激，25 min。
10. 30℃水浴复苏1 h。
11.离心收菌，室温，4000 rpm ，5 min，弃上清，用6 ml无菌水重悬菌体，尽量温和地混匀，从中取20 ul培养物稀释后涂SD-TL平板，用于检测文库转化效率。其余涂相应的平板20块。
12. 30℃恒温培养3-7天，观察菌落生长。
13. 挑取长出的克隆单菌落，转接到相对应的筛选平板中继续培养3-5天。
▼案例展示
▼注意事项
启动子文库酵母工作菌液避免反复冻融，使用时请在冰上解冻。
▼技术支持
本公司产品使用过程中如有任何疑问与建议，欢迎随时与我们联系：market@bestofbest.top
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