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无细胞体系Pull down

▼服务简介

无细胞蛋白表达系统又称为体外翻译系统,是一种以外源目的mRNA或DNA为蛋白质合成模板,通过人工控制补加蛋白质合成所需的底物和转录、翻译相关蛋白因子等物质,能实现目的蛋白质的体外蛋白合成,与传统的体内重组表达系统相比,体外无细胞合成系统具有多种优势。

pull down技术用固相化的、已标记的饵蛋白或标签蛋白(生物素-、PolyHis-或GST-),从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白。通过Pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系,从体外传路或翻译体系中检测出蛋白相互作用关系。

▼技术优势

瑞源生物无细胞表达平台可为您提供完善的技术服务,针对目的蛋白的特殊性质,专业解决蛋白表达相关难题,如蛋白产量较低、表达特殊蛋白(如膜蛋白、毒性蛋白等)、制备蛋白复合物、平行合成多种不同蛋白等。

1. 省时,不需要培养细胞,可直接从PCR产物,质粒或mRNA表达蛋白质,几小时内得到蛋白质;

2. 反应体系小,可在不同的原核和真核系统中平行表达;

3. 高通量,反应周期短,能满足高通量配体筛选和蛋白质组学的科研要求;

4. 灵活开放的反应体系,便于改变各项反应条件,有利于调控基因的转录,蛋白质的合成和翻译后修饰,避免包涵体的形成;

5. 稳定的反应体系,可以偶联其它工艺,形成自动化、程序化、规模化生产,加快重组蛋白的纯化、功能表征和后续的结构解析;

6. 无细胞结构限制,可用于生产对宿主有毒害作用的外源蛋白,避免蛋白表达对宿主细胞的致死作用;

7. 添加非天然氨基酸或同位素标记氨基酸,表达特殊蛋白。

8.对于多次跨膜或由于疏水性强导致的普通细胞系表达困难的项目有显著改善。

▼服务内容

项目步骤及交付标准

亚克隆构建至PD2P

1

1、原始数据、结果图片

2、标准实验报告(含实验步骤、流程)

3、含有目的基因的质粒及测序报告

无细胞表达+纯化

1

 

Pull down一对一验证:

A、Western blot/SDS-PAGE检测

B、平衡树脂

C、蛋白互作试验

D、SDS-PAGE / Western blot验证

 

1

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